平行反应监测（Parallel Reaction Monitoring，PRM），是一种靶向定量蛋白组的研究方法，基于高分辨、高精度质谱靶向定量技术，能对目标蛋白质、肽段进行选择性检测，可以为几十到上百个目标蛋白提供精确的绝对定量。该技术可用于广筛数据的验证，如相对定量蛋白组获得的目标蛋白后通过PRM进行验证。
除在心力衰竭（HF）中起到有益作用外，盐皮质激素受体拮抗剂还可在机制上游发挥作用以预防HF发生。在HF风险人群中，Heart OMics in AGEing (HOMAGE）试验表明，螺内酯治疗可起到抗心肌抗纤维化和抗重塑的作用，进而减缓HF的进展。本研究旨在进一步了解螺内酯作用的潜在机制，并评估其对多种血浆蛋白生物标志物及其各自潜在生物学途径的影响。
HOMAGE试验参与者的基线、1个月和9个月（或最后一次访问）的血浆样品
使用。Olink Proseek-Multiplex cardiovascular and inflammation panels分析276个HOMAGE试验参与者在基线、1个月和9个月（或最后一次访问）的血浆样品中蛋白质生物标志物。使用协方差分析评估螺内酯对生物标志物的影响，并通过知识网络分析进行探索。
1.螺内酯对基线到最后一次随访的血浆蛋白的影响
与对照相比，螺内酯治疗后的参与者中有18种蛋白质水平下降（p<0.05) ，其中4种蛋白质的水平下降最多（FDRq<0.05)，这四种分别是COL1A1（I型胶原α1链），MMP2 （基质金属蛋白酶2) , BNP（脑利钠肽）和PAPPA（妊娠相关蛋白A)（图1）。
2.在第一个月和最后一次访问时都发生变化的蛋白质
与对照组相比，螺内酯治疗组在第1个月和第9个月时有19种蛋白质发生显著变化（p<0.05）。其中，包括COL1A1、MMP2、BNP等在内的五种蛋白质减少，包括肾素、白介素12B、人α1微球蛋白／bikunin蛋白前体等在内的14种蛋白质增加（表1）。
3.网络分析
将螺内酯治疗后强烈变化的10种蛋白质（FDRq<0.05）用于网络分析，结果发现可鉴定3个蛋白簇和6种生物学功能。与这10种蛋白质具有最强关联的途径是RAAS途径，细胞外基质（ECM）代谢，胰岛素生长因子（IGF）信号传导，止血和脂肪细胞因子信号传导。为更广泛地了解生物网络，使用螺内酯治疗后显著改变的所有51种蛋白质（p<0.05）进行网络分析（图3）。结果发现，螺内酯直接影响RAAS途径，然后激活下游原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src。
Joao Pedro Ferreira, Job Verdonschot, Ping Wang，et al. Proteomic and Mechanistic Analysis of Spironolactone in Patients at Risk for HF. JACC Heart Fail. 2021 Apr;9(4):268-277. JACC Heart Fail. 2021 Apr;9(4):268-277. doi: 10.1016/j扣hf.2020.11.010. Epub 2021 Feb 3.
克罗恩病（CD）是肠道慢性炎症，约三分之一的CD患者在诊断后5年内接受肠切除术。在没有治疗的情况下，70%以上的患者在回肠结肠切除术后一年内出现内镜炎症复发。国际指南建议结肠镜检查评估切除术后6-12个月内CD复发的情况，但结肠镜检查一方面给医疗资源带来沉重负担。另外，因存在肠穿孔等风险，患者的可接受度也有限。本研究试图确定与CD复发相关的基于血液的生物标志物，提高术后识别内镜复发的能力，而无需进行有创的内镜评估。
成年CD患者术后结肠镜检查时抽取的血液分离的血清样本
CD患者在术后结肠镜检查时抽血获得血清样品，使用Olink inflammation panel对血清样本同时定量92中蛋白质生物标志物的表达，后进行主成分分析。对鉴定的蛋白质标志物进行ROC分析，以检测其对CD复发的识别能力。
1.CRP ( C反应蛋白）与Rutgeerts评分和血清蛋白的关联
对213名患者进行第一次（n=206）和第二次（n=78）手术后结肠镜检查，并获得血清样本。内镜复发患者的中位CRP比较高 ( p=0. 001) , CRP与白介素6 ( IL6）在内的几种细胞因子呈正相关。
2.血清蛋白与Rutgeerts评分之间的相关性
结果显示， Rutgeerts评分与CRP、CXCL9、MMP1、MMP10、CCL23、FGF5、CSF1和IL15RA呈正相关，其中C×CL9是C×CR3 配体。与IL5、ST1A1、NT3、ARTN和ONER呈负相关。
3.使用候选蛋白质生物标志物鉴定疾病复发
选择在贝叶斯分析中鉴定为与Rutgeerts评分最相关蛋白质（正相关或负相关）纳入ROC分析，这些蛋白质分别是CXCL9, MMP1 , IL5 和ST1A1。分别做下面三种曲线：（1）单独的log CRP, ( 2)单独的CXCL9，和（3) CxCL9、log CRP、MMP1、IL5和ST1A1（图 3）。三种曲线的AUC分别是0.64、0.69和0.74，说明与C反应蛋白相比，组合模型的鉴别能力更强。
Margaret Walshe, Shadi Nayeri, Jiayi Ji, Cristian Hernandez-Rocha, et al. A role for CXCR3 ligands as biomarkers of post-operative Crohn’s disease recurrence. J Crohns Colitis. 2021 Oct 26; jjab186. doi: 10.1093/ecco-jcc/jjab186. J Crohns Colitis. 2021 Oct 26; jjab186. doi: 10.1093/ecco-jcc/jjab186. Online ahead of print.